BCA法是一种常用的蛋白质浓度检测方法,也被称为双硫键还原法。其原理是在碱性条件下,受检样品中的蛋白质与蛋白质标准质量的比较样品中的蛋白质含有相同数量的肽键,与含有蛋白质的检测样品中的肽键发生反应,生成紫色复合物,复合物的颜色强度与样品中蛋白质的浓度成正比。因此,通过比较待测样品与已知浓度蛋白质标准品的吸光度,可以计算出样品中蛋白质的浓度。
该方法的优点是灵敏度高,适用于含有1-200 μg/ml蛋白质的样品。同时,该方法的操作简单,具有较低的误差率,适用于高通量蛋白质分析。下面是BCA蛋白浓度检测方法的详细步骤:
1.准备蛋白质标准曲线:使用不同浓度的蛋白质标准品制备一组蛋白质标准曲线。将标准品加入BCA试剂中,然后在烘箱中加热,使其转化为终浓度为0.5-25 mg/ml的蛋白质标准溶液。每个标准品应该设置三个孔位进行测量。
2.制备待测样品:样品需要在含有蛋白质稀释液的缓冲液中进行稀释。将待测样品加入BCA试剂中,同时加入同样浓度的缓冲液,然后进行烘箱处理,待其转化为蛋白质后进行测量。
3.读取吸光度值:使用酶标仪在562 nm处测量每个标准品的吸光度。使用标准曲线计算待测样品中蛋白质的浓度。
总之,BCA法是一种灵敏度高、误差低、操作简单的蛋白质浓度检测方法,适用于高通量蛋白质分析和含有蛋白质1-200 μg/ml的样品。