活性氧(reactive oxygen species,ROS)是指带有氧自由基的分子,一般指氧化还原循环中高度反应性的分子,包括超氧自由基(superoxide, O2.-)、羟自由基(hydroxyl radical, OH.)、一氧化氮(nitric oxide, NO.)等。ROS在细胞内部扮演着重要的生物学功能角色,如参与氧气的利用与能量代谢、细胞信号转导、抗菌、脂质代谢和肿瘤发生等多种生物学过程。但当ROS产生过多或清除不及时时,会破坏生物大分子如蛋白质、核酸和脂质,导致细胞膜失稳、细胞凋亡和肿瘤等多种疾病。因此,活性氧的检测非常重要。
活性氧的检测方法:
(1)DHE染色法:此方法采用一种非荧光性的偶氮染料-二羟乙基-2′,7′-花青苷(DHE)探测ROS的产生。DHE与ROS交互作用后被氧化为具有沿着DNA产生荧光的有机阳离子-氧化乙基-2′,7′-花青苷(DHE+)。
(2)DCFH-DA染色法:DCFH-DA是一种荧光探针,可以被细胞摄取。DCFH-DA被细胞酯酶水解,形成非荧光性的二羟基苯基荧光素(DCFH),与ROS反应后可被氧化为高荧光的二羟基苯基荧光素(DCF)。
(3)Lucigenin增强EMS法:Lucigenin是一种荧光物质,可增强细胞内的光电流,从而探测细胞中超氧自由基的产生、释放与清除。Lucigenin EMS法是一种敏感、快速、简单的定量检测超氧自由基产生的方法。
(4)Cypridina荧光法:Cypridina荧光物质是一种光化学物质,能够被氧气氧化,并释放出荧光。该法可以探测基于O2.-的化学反应和解释非酶性和部分酶性超氧自由基释放。
总之,不同的活性氧检测方法各有优缺点,应根据需要选择合适的方法。通过检测活性氧,可以深入了解活性氧的产生和清除机制,为相关疾病的研究提供可靠的实验数据。