乙酰化是一种重要的蛋白质修饰过程，它通过转移乙酰基团到靶蛋白的特定位置来调节蛋白质的功能和稳定性。在细胞内，乙酰化可以影响DNA修复、基因转录、代谢调节、信号传导等各个方面，因此对乙酰化蛋白水平的测定是研究生命科学中很重要的一环。
乙酰化蛋白水平的测定方法主要包括Western blot、免疫组化、质谱分析等。下面我将从这三个方面进行详细介绍。
1. Western blot
Western blot是一种广泛应用于蛋白质检测和定量的方法。通过Western blot可以检测蛋白质的存在和相对含量，并且可以确定蛋白质的分子量大小。对于乙酰化蛋白的测定，可以先利用抗体对乙酰化位点进行特异性识别，然后再进行Western blot实验。具体步骤如下：先用SDS-PAGE将样品分离出蛋白质，再将蛋白质转移到聚丙烯酰胺（PVDF）或硝酸纤维素（NC）膜上，随后用与乙酰化蛋白特异性抗体反应，然后通过化学反应可视化目标蛋白条带。Western blot所需的抗体具有很高的特异性和灵敏度。但是需要注意的是，该方法依赖于抗体的特异性，因此需要先进行充分筛选鉴定，否则可能存在交叉反应导致干扰的风险。
2. 免疫组化
免疫组化（IHC）是一种检测蛋白质表达及位置的方法。免疫组化包括固定组织切片，免疫染色，然后通过显微镜观察，可以获得蛋白质的定位，相对定量和分布情况。免疫组化和Western blot相比，优点在于可以同时得到组织学信息，确定蛋白在细胞中的分布状态。对于乙酰化蛋白水平的测定，IHC可以使用与Western blot类似的抗体来进行免疫染色，然后通过显微镜观察染色程度进行相对定量。但是需要注意的是，IHC在样品处理，抗体选择和修剪等方面存在特别的挑战。
3. 质谱分析
质谱分析是一种定量蛋白质的方法，可对大量存在于样品中的成分进行鉴定和定量，由于准确性和强大的生物信息学能力，越来越得到广泛应用。在乙酰化蛋白水平的测定中，质谱分析是一种非常有前途的方法。乙酰化是蛋白质修饰中较小的一种，因此可以通过质谱分析来检测哪些氨基酸残基上乙酰化，测定其乙酰化程度。质谱分析可以分为飞行时间质谱（TOF）、串联质谱（MS/MS）等技术，其中最常用的是高效液相色谱质谱联用技术（LC-MS/MS）。质谱分析对样品的要求较高，需要比较专业的仪器和技术支持，操作比较复杂，但是可以提供非常准确的结果。
综上所述，目前常用于乙酰化蛋白水平测定的方法包括Western blot、免疫组化和质谱分析，不同方法各有优缺点，应根据实验具体应用的情景和要求选择适当的测定方法。