双缩脲法(Biuret法)是一种测定血清蛋白质含量的方法,也是一种比较常用的方法。下面就来简单介绍一下双缩脲法的原理和操作方法。
原理:
双缩脲法是利用蛋白质与碱式铜缩脲离子(Cu²⁺-biuret离子)在碱性条件下形成紫色络合物的原理来测定蛋白质含量。这种络合物颜色深浅与蛋白质含量成正比。
操作方法:
1. 标准曲线的制备:先将一定浓度的标准蛋白质(如牛血清白蛋白)分别加入不同浓度的缩脲溶液中,在约60℃的水浴中孵育30分钟,然后冰镇回室温后,测定吸光度。然后绘制标准曲线,将待测的血清样品的吸光度值对应到标准曲线上即可得到相应的蛋白质浓度。
2. 取适量血清样品,加入相应体积的双缩脲试剂,充分混匀,置于约60℃的水浴中孵育30分钟,然后冰镇回室温后,测定吸光度。
注意事项:
1. 吸光度的测定要在孵育和冰镇回室温后充分稳定后才能进行。
2. 双缩脲试剂使用前要充分混匀。
总之,双缩脲法是一种简单、易操作、重现性好的方法,常用于测定血清蛋白质含量。当然,在实验操作中还需注意样品的保存、试剂的使用及浓度等一系列问题。