实验 蛋白质的测定

发布时间:2023年5月13日 23:06

一、实验目的

本实验旨在利用比色法测定鸡蛋清中蛋白质含量,掌握比色法的原理、方法和应用。同时,也可以检验实验者操作的精确性和准确性。

二、实验原理

蛋白质是生命体中含量最多的重要有机分子之一,具有很多功能,如酶、携带物质、免疫反应、结构组成等。在生命体中有很多种不同的蛋白质,但它们都是由20种氨基酸组成的。在比色法测定蛋白质的方法中,是根据蛋白质中含有的氨基酸与某些试剂的反应,使颜色出现比较强的吸收峰,再利用分光光度计进行测定,从而得到蛋白含量的。

常用的比色试剂有以下几种:

1.肯德尔试剂:它是一种含有铜离子的碱性溶液,可以使蛋白质与铜离子发生褪色反应。

2.涅斯特林试剂:这是一种酸性溶液,它可以使蛋白质与染料素之间的吸附发生变化而变色,从而得到比较强的吸收峰。

三、实验步骤

1.取不同浓度的标准蛋白质溶液,用磷酸缓冲液稀释到各不同含量的溶液,分别标记为S1、S2、S3等等,其蛋白质的含量需在包装标明。

2.取一定量的鸡蛋清,用磷酸缓冲液稀释到同样的浓度,标记为U。

3.取三个试管,分别加入1ml S1、S2、S3标准溶液。

4.取另外三个试管,分别加入1ml稀释后的鸡蛋清溶液。

5.在每个试管中加入5ml比色试剂,摇匀,并置于室温下10分钟。

6.用分光光度计在546nm波长处测定各试管溶液的吸光度。

4、数据处理

1.绘制标准曲线,以样品的吸光度值和蛋白的浓度作为横坐标和纵坐标,分别进行线性回归分析,以得到标准曲线的方程和决定系数。

2.利用样品的吸光度值,按照标准曲线的方程进行换算,得出样品中蛋白质的含量。

四、实验注意事项

1.实验前需要检查比色试剂的质量是否达到要求。

2.在实验操作过程中,要保证试样和试剂中的蛋白质浓度都在合适的范围内,否则会影响测定结果。

3.在实验中要按照正确的操作步骤进行,避免误操作和操作失误。

4.在数据处理过程中,要保证所得数据的准确度和精确度,避免数据误差。

五、实验结果分析

1.通过实验测定得出的样品中蛋白质的含量和标准曲线相比较,可以确定样品中蛋白质的含量是否符合标准要求。

2.通过对不同样品的测定可以判断不同来源的样品中蛋白质含量的差异。

3.通过对测定结果的分析可以评估比色法测定蛋白质的准确性和精确性,以及实验操作的正确性和经验积累的程度。

六、实验结果应用

本实验测定蛋白质的含量是很重要的,在生物学、化学、医学等领域都有应用。例如,可以用于检测食品、化妆品中的蛋白质含量,可用于工业上生产生物制品的监测。同时也可以作为科学研究中,衡量细胞和生物体中蛋白质的含量和变化的一种方法。