蛋白质是生命体系中的重要有机物质，具有多种生物学功能。蛋白质的结构与功能密切相关，蛋白质的电性质也是其结构性质的重要组成部分。蛋白质的等电点是指在特定条件下，蛋白质呈等电状态的 pH 值，是蛋白质电性质的一个重要参数。测定蛋白质等电点有很多方法，如等电聚焦法、凝胶过滤法、等温点漂移法、等电点电泳法等。本文将详细介绍等电点电泳法。
等电点电泳法（isoelectric focusing，IEF）是一种基于蛋白质分子的等电点特性的分离方法。具体实验步骤如下：
1. 制备等电聚焦胶
等电聚焦胶是用于蛋白质等电点测定的重要材料。可以选择用聚酰胺胶（polyacrylamide gel）或者凝胶硅胶（agarose gel）制备。根据实验需要，可以制备不同 pI 值范围的等电聚焦胶。
2. 样品准备
将所需的蛋白质样品洗净，制备合适的电泳缓冲液。通常的电泳缓冲液 pI 值为 8.3。
3. 加样电泳
用样品在等电聚焦胶上进行加样电泳，加样时需要保证样品的均匀和准确。
4. 电泳操作
将加样后的等电聚焦胶放入电泳槽中进行电泳，电泳时间要根据 pI 值的范围进行选择，常见的时间为 3-6 小时。
5. 实验结果分析
将电泳完成后的等电聚焦胶放入染色剂溶液中进行染色。根据不同的染色方式，可以得到不同特异性的染色结果。通过比较等电点特异的蛋白条带，可以得到样品中蛋白质的等电点值。
等电点电泳法测定蛋白质等电点的优点是分离效果高，分离谱简洁，分离范围广，可以分离出 pI 值在 3-10 的蛋白质，对于纯化复杂的蛋白质样品具有很好的适用性。但等电聚焦胶制备繁琐，操作也比较复杂。
总之，等电点电泳法是一种常用的蛋白质等电点测定方法，可以快速准确地分离蛋白质，并且具有广泛的适用性。