考马斯亮蓝法(Bradford method)是一种快速、简便、灵敏的蛋白质定量方法之一。该方法主要基于考马斯亮蓝G-250(Coomassie Brilliant Blue G-250)与蛋白质结合,由此形成的复合物在波长595nm处具有明显的吸收峰。这种吸收峰与蛋白质的加量成正比关系,可以用来计算蛋白质的浓度。
考马斯亮蓝法的具体操作流程如下:
1. 准备标准曲线:先用已知浓度的蛋白质标准品(如卵清蛋白)制备一系列不同浓度的标准溶液。
2. 操作步骤:
- 取一定量的蛋白质样品加到离心管或试管中。
- 加入足量的考马斯亮蓝G-250缓冲液,使液体呈现蓝色。
- 在混合后的溶液中孵育一定时间,一般为5-10分钟。
- 使用光度计在595nm处测量吸光度,并使用标准曲线计算出蛋白质的浓度。
需要注意的是,考马斯亮蓝法并不适用于所有类型的蛋白质,其中一些像镰刀形血红蛋白和巨球蛋白等蛋白质测定是不准确的。同时,该方法不应被用于含有明显浑浊、沉淀物或涂层的样品。
总之,考马斯亮蓝法是一种常用的蛋白质定量方法,其操作简单、成本低廉、灵敏度高,因此广泛应用于生化学和分子生物学领域的各种实验中。