蛋白质是生命体系中的重要组成部分之一，其浓度测定是分子生物学和生物化学研究中常见的基础实验之一。测定蛋白质浓度的方式有多种，其中比较常用的是分光光度法。分光光度法的基本原理是通过测定蛋白质在特定波长下的吸光值来推算其浓度。下面将为您详细介绍蛋白浓度测定吸光值的相关知识。
一、吸光定律
根据分光光度法的原理，一个物质在特定波长下的吸光值与该物质的浓度成正比关系，这个规律被称为吸光定律。吸光定律的公式表达如下：A=εbc，其中A为吸光值，ε为摩尔吸光系数（一个物质在特定波长下的吸光系数），b为光程长度，c为溶液中物质的摩尔浓度。
吸光定律基于物理学原理，可以用于多种化学和生物样品的定量分析。在蛋白质浓度测定中，通常是以280nm波长下的吸光值为参考值。
二、蛋白质吸光系数
蛋白质吸光系数是指在特定波长下，蛋白质单位摩尔质量所吸收的光的强度，通常用单位长度（1厘米）的蛋白溶液吸收1摩尔（1毫摩尔）光的比率来表示。吸光系数越大，说明在特定波长下蛋白质吸收的光越多，因此测定蛋白质浓度时需要考虑不同蛋白的吸光系数。常见蛋白的吸光系数大约在1-5左右，因此对于不同蛋白浓度的测定，需要根据不同的吸光系数进行调整。
三、蛋白质浓度测定吸光值的注意事项
1. 光程长度影响测定结果，通常要求测定中使用比较标准的、确定的光程长度。通常使用1cm的石英比色皿。
2. 样品的纯度和清洁度对测定结果影响比较大。如果样品含有杂质，将会影响吸光值的测量。同时，样品本身具有颜色（如血红蛋白），也会导致误差。
3. 选择合适的吸收波长也会影响测定结果。对于大多数蛋白质来说，280nm波长比较适合测定。
4. 如果测定样品是在含有其他成分的溶液体系中，需要从总吸光值中减去这些成分的吸光值，得到净吸光值。
总之，蛋白质浓度的测定是生化实验中必须的基础操作。通过分光光度法测定蛋白质浓度，可以直观的了解样品的含量，让我们更深入的研究蛋白质的结构、功能以及相互作用。