蛋白质是细胞生命的重要组成部分,也是人体内重要的营养物质,是鉴定和检测生物样本中蛋白质含量和种类的重要途径。因此测量蛋白质的方法和试剂非常重要。目前,有许多试剂可用于测量蛋白质,下面就介绍几种最常用的蛋白质测定试剂。
1、Bradford法
Bradford法是一种常用于测定蛋白质含量的方法。这种方法基于蛋白质与染料之间的化学反应,通常使用Coomassie蓝G染料,其吸收波长在465 nm处。Coomassie蓝G染料可以在 pH 3.0 - 4.0 条件下结合到蛋白质上并形成蓝色化合物,这个复合物是可见光吸收最强的,且有正比于蛋白质的含量。 由于该试剂可以分辨各种类型的蛋白质,因此广泛应用于在体和体外测定蛋白质的含量。
2、Lowry法
Lowry法是一种比Bradford法更为敏感的蛋白质测定方法。该方法使用费氏试剂,该试剂基于还原性蛋白质与铜离子在碱性条件下发生的置换反应而发展。这种方法的灵敏度高,偏离线性范围较小,但对蛋白质的类型和成分较为敏感,也容易受到非蛋白质的物质如尿素、EDTA等干扰。
3、Bicinchoninic acid(BCA)法
BCA法基于多肽和蛋白质中含有的两个相邻的螯合位点,与碱式镉离子在酸性环境中发生的化学反应和铜离子协同作用,形成典型的紫色螯合物,这样的光学性质可以被用于蛋白质定量。BCA法与其它方法相比,不易受到化学杂质的干扰。BCA法被广泛用于体外、体内和尸体检查中。
总而言之,以上方法与试剂只是蛋白质测量中的一部分。选择适当的方法与试剂是取得准确且可靠的蛋白质分析结果的关键步骤,必须注意样品的性质,保持一个严格的操作流程,避免因为杂质和其他干扰物采样出现误差。