紫外线吸收法测定蛋白质含量

发布时间:2023年8月29日 14:05

紫外线吸收法是一种常用的测定方法,用于测定蛋白质含量。这种方法基于蛋白质分子的吸收能力,通过测量样品在特定波长下的吸光度来计算蛋白质的含量。该方法精确度高、操作简单、快速,因此被广泛应用于蛋白质测定。

紫外线吸收法的基本原理是:蛋白质分子中的天然色氨酸和苯丙氨酸等芳香族氨基酸在近紫外区域(250-320nm)表现出强烈的吸收。另一方面,蛋白质分子中的肽键、脯氨酸和半胱氨酸等非芳香族氨基酸也可在近紫外区域吸收一定的光线。通过测量溶液在特定波长下的吸光度,可以推算出蛋白质的含量。

测定蛋白质含量的标准曲线是根据已知浓度的蛋白质溶液制得的。在标准曲线的基础上,通过测量待测样品的吸光度值,可计算出样品中的蛋白质含量。

总结起来,紫外线吸收法测定蛋白质含量的步骤如下:

1. 制备标准曲线:准备一定浓度的蛋白质溶液,并在一定波长下测量其吸光度值。将不同浓度的蛋白质溶液依次测量其吸光度值,制作出蛋白质浓度与吸光度值的标准曲线。

2. 测定待测样品的吸光度值:将待测样品加入一定体积的缓冲液中,将混合物在一定波长下测量其吸光度值。如此可得到样品的吸光度值。

3. 计算蛋白质含量:利用标准曲线中蛋白质浓度与吸光度值的相关性,计算出待测样品中的蛋白质含量。

此外,还需要注意以下几点:

1. 紫外线吸收法的应用范围较窄,不能测定含有多种吸收物质的混合物中的蛋白质含量。

2. 混合物中其他成分的存在可能影响测定结果,应做好必要的干扰消除工作。

3. 测定前需要清洗玻璃仪器以消除污染源的干扰。

总之,紫外线吸收法是一种精确、简便、快速的蛋白质测定方法。它的原理简单易懂,操作方便,适用于许多蛋白质测定的场合。在科研和生产中得到广泛的应用和推广。