Bradford法是一种测定蛋白质浓度的方法，主要基于染料结合蛋白质会发生颜色变化的原理。该方法包括三个主要步骤：制备标准曲线、样品和标准品与染料的反应、吸光度测定。
首先，为了制备标准曲线，需要使用已知浓度的蛋白质标准品进行反应。标准品的选择要根据要测定的具体蛋白质类型来确定。常见的标准品有牛血清白蛋白（BSA）和人血清白蛋白（HSA）。标准品浓度范围一般为0-2000 μg/ml。在该步骤中，将一定浓度的标准品与Bradford染料反应，并测定其吸光度，然后将吸光度值用于制备标准曲线。
其次，将待测样品与同样的Bradford染料反应。样品中的蛋白质会与染料结合并导致染料从蓝色转变为品红色。反应完成后，用分光光度计测定样品溶液的吸光度值，并将其与标准曲线中的吸光度值进行比较，从而计算出样品中蛋白质的浓度。
Bradford染料是这一测定法最核心的组成部分。该染料是由酚酞、磷酸和甲醛组成的复合物。在弱酸性环境下，该染料会与蛋白质上的大量氨基酸残基（尤其是赖氨酸和精氨酸）发生相互作用，从而导致染料颜色转变。这种相互作用是静电吸引和范德华力的结果。当染料与蛋白质结合时，会发生一系列化学变化，这些变化导致染料的比色特性发生改变。
与其他测定蛋白质的方法相比，Bradford法具有操作简便、成本低、测定速度快以及灵敏度和线性范围广等优点。该方法广泛应用于蛋白质生化、分子生物学、免疫学、细胞培养等领域。然而，需要注意的是，不同蛋白质类型对Bradford染料的反应力度存在差异，因此在分析不同蛋白质样品时需要进行优化和校准。此外，该方法对相关干扰物质敏感，因此需要进行干扰物质除去或模拟消除等操作。