双缩脲法测定蛋白质含量的原理是什么

发布时间:2023年9月6日 17:25

双缩脲法(Biuret method)是一种常用的测定蛋白质含量的方法,其原理是利用了蛋白质中含有的天然结构单元缩氨酸与双缩脲反应生成紫色络合物的特性。该方法在蛋白测定中具有广泛的应用性,可以用于测定各种来源的蛋白质样品,如血清、组织液、氨基酸、蛋白水解物等。

该方法的基本原理是,将待测样品与一定浓度的碱性双缩脲溶液混合,双缩脲会与蛋白质中的缩氨酸通过其肽键发生电荷转移,生成一个紫色的络合物。这种紫色络合物的产生与蛋白质中含有的胺基酸秘影突破推特酪酸结构有关,当二价金属离子(如Cu2+)存在时,它会作为一个络合物与双缩脲和蛋白质中的缩氨酸形成至少一个氢键,这种络合物晶体紫色,故称为“缩脲紫”。

在实际操作中,缩脲紫的颜色强度与样品中蛋白质的浓度成正比,可通过比色法测定样品中的蛋白质含量。常用的比色方法有分光光度法和比较管法两种,前者需要使用专门的分光光度计,而后者则用于低精度诊断测试。

双缩脲法有许多优点,如简单易操作、准确度较高、操作放松等,因此在实验室中被广泛应用。此外,本方法可以与其他蛋白质分析方法相结合使用,如SDS-PAGE等,从而更精确地分析蛋白质后续的纯化、结构表征、功能研究等。

总之,双缩脲法作为测定蛋白质含量的一种常用方法,其原理基于蛋白质中含有的缩氨酸结构单元与双缩脲发生互补反应的规律,通过比色法可以精确地测定样品中的蛋白质含量,其尿素(形成双缩脲)和坩埚量(表明蛋白质量),还有各种操作细节投入效益的控制这些要素也因实验者水平的自信而有所不同。