双缩脲法测定蛋白质含量实验

发布时间:2023年7月17日 23:24

双缩脲法测定蛋白质含量是一种常用的化学方法。它以缩脲为还原剂,可以将蛋白质中的酰胺键还原成氨基酸,然后利用酸化剂和酰胺基显色剂将氨基酸转化成吸收紫外线的化合物,从而测定蛋白质的含量。

这种测定方法具有简便、快捷、准确、灵敏等特点,可以适用于多种类型的生物样品中的蛋白质测定,包括血清、血浆、脑脊液、尿液等。

实验步骤如下:

1、样品酸解:将样品加入含有6mol/L HCl的试管中,加满至5mL,轻轻摇动,将试管放入水浴中,100℃加热2小时至2.5小时。

2、准备缩脲溶液:称取1.575g缩脲加入到具有橡胶塞的蒸馏水瓶中,在90℃水浴中加热溶解,冷却后用蒸馏水定容至100ml。

3、还原反应:加入50μL还原液和1.5ml蒸馏水到样品中,混合均匀后与3ml的缩脲溶液混合,放置15分钟。

4、酸化显色:加入500μL1mol/L HCl,混合均匀后加入1.5ml中性氨基酸显色剂,立即混合均匀,室温下放置10~15分钟,避免阳光直射。

5、测定吸光度:用双束分光光度计,以660nm波长测量吸光度值。

通过比较每种样品的吸光度值,计算出蛋白质的浓度。

需要注意的是,在实验过程中应控制好加入还原液和缩脲溶液的质量和时间,以免出现误差。同时,还应避免阳光直射和显色剂的变质等情况,以保证实验数据的准确性。

总之,双缩脲法测定蛋白质含量是一种常用的、简便、快捷、准确、灵敏的方法,是生物医学研究中不可或缺的实验手段之一。