HPLC，即高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography），是一种高分辨率、高效率、高灵敏度的分离和分析技术，广泛应用于生物医学、食品、化学等领域，可以快速、准确地检测蛋白。
HPLC检测蛋白的原理是基于蛋白分子的物化特性：亲水性、电荷性和分子量等差异，用高效液相色谱技术进行分离并定量。HPLC技术目前已经成为生物医学领域中最常用的蛋白质定量和分离的方法之一。
一般而言，HPLC检测蛋白的过程可以分为样品前处理、色谱柱和检测偏移三步。
样品前处理
样品前处理是HPLC检测蛋白的重要步骤。重点是提取样品中的蛋白，通常用于对样品进行预处理的方法包括裂解、离心、超声波处理、钝化与净化等方法。其中最常用的是表面透析、离心、超声波打断等方法。另外，还需要加入提取样品的缓冲液，溶解样品的缓冲液一定要符合蛋白质实验条件，PH值应在6.5~8.0之间，溶液应足够清晰，温度应在4°C~8°C 之间。同时，所有使用的试剂必须是高纯度的，避免对分析结果造成影响。
色谱柱分离
分离是分析检测的核心步骤，通常采用反向非水相液相色谱法（RP-HPLC）。这种方法可根据样品的亲水性、电性等特性进行有效分离。通常将样品加入到 RP-HPLC 柱前，并通过梯度洗脱、暴露和吸附等方式来对蛋白进行分离，从而快速准确地分离出目标物质，确保干净的背景（低杂波）。RP-HPLC柱用于分离蛋白时，通常使用的是C18柱，因为这种柱可以提供较好的保留和分离效果，同时其反相作用对生物分子也不会产生太大的损害。
检测偏移
最后一步是检测偏移，这一步可以区分出分离出来的蛋白质。检测方法通常是紫外吸收光谱检测，其原理是利用蛋白质内色素簇上主要吸收起始位点的波长。同时，可以采用高灵敏度的荧光检测法，以大幅提高检测水平。
综上所述，HPLC技术在生物医学领域中的应用非常广泛，可以快速、高效、准确地检测蛋白质，有助于深入了解细胞机制和疾病发展的机理，对于药物开发和生物学研究都有重要意义。