乳制品是人类日常生活中不可或缺的一种食品,它含有丰富的营养物质,其中蛋白质/">蛋白质是关键成分之一。因此,在乳制品加工和质量控制过程中,蛋白质的检测显得尤为重要。下面我们就从蛋白质构成、测定原理、主要方法及应用等方面来介绍乳制品蛋白质检测方法。
一、蛋白质构成
乳制品中的蛋白质大约占其总量的3-4%,主要分为酪蛋白、乳清蛋白和其他蛋白三种。其中,酪蛋白和乳清蛋白构成了乳制品中蛋白质的90%以上,而其他蛋白则仅占很小一部分。
二、测定原理
乳制品蛋白的检测方法根据成分不同,检测原理是有差异的。以酪蛋白和乳清蛋白为例,其检测原理如下:
1.酪蛋白检测原理
酪蛋白是乳制品中主要的蛋白质成分,因此酪蛋白的测定也是乳制品质量控制的重要环节之一。检测方法可分为定性测定和定量测定两种。
(1)定性测定
酪蛋白的定性测定主要是通过特异性反应,采用凝胶电泳、酶联免疫吸附测定法等来检测酪蛋白。其中,凝胶电泳是一种简单易行、精度高、灵敏度较高的检测方法,可用于检测酪蛋白的种类和含量。
(2)定量测定
酪蛋白的定量测定主要有以下几种方法:
①Kjeldahl法
该法适用于检测所有蛋白,包括酪蛋白、乳清蛋白等,但该方法检测时间长,样品处理较为复杂,且有食品成分干扰。
②Bradford法
该法是利用考马斯亮蓝G-250对蛋白质的比色反应来定量蛋白质,具有简单快速、灵敏度高的优点。但该法易受其他成分的干扰,需要进行高纯度标准品校准等。
③浊度法
该法是利用蛋白质与某些重金属离子形成的复合物,使溶液中出现浑浊的现象来测定蛋白质含量。该法具有实验简便、成本较低等优点,但灵敏度有限。
2.乳清蛋白检测原理
乳清蛋白是乳清中的主要蛋白质成分,也是大部分乳制品中的重要蛋白质成分。因此,在乳制品的生产中,乳清蛋白的测定在一定程度上反映了乳制品的质量。在乳清蛋白的测定中,常用的方法有:
(1)Biuret法
该法是常用的定量测定蛋白质的方法之一,其原理是利用铜离子与蛋白质形成的染色基质进行定量测定。该法的优点是操作简单,准确度较高。
(2)BCA法
BCA法即双硫键还原法,也是一种测定蛋白质含量的方法。其原理是在碱性条件下,蛋白质与铜盐和一种双胺基的螯合剂产生染色反应,反应后的产物能够吸收在552nm处的可见光,因此蛋白质的含量可以通过比色测定。
(3)Nessler化合物法
Nessler化合物法是一种适用于乳清蛋白测定的方法。该法的原理是基于乳清蛋白与氨基酸中的部分含氮物质反应形成黄褐色物质,通过比色,可以测定乳清蛋白的含量。
(4)Lowry法
Lowry法是另一种测量乳清蛋白含量的方法,该方法原理是利用双碱性铜试剂和蛋白质产生的染色剂进行吸收光密度的定量测定,该法操作简单,结果准确,但成本较高。
三、主要方法及应用
针对不同类型的乳制品,如牛奶、酸奶、干酪、奶粉等,其蛋白质含量及种类各不相同,因此需要根据实际情况选择合适的测定方法。常见的乳制品蛋白测定方法有:
1.常规比色法
常规比色法是最简单易行的一种方法,针对牛奶的蛋白质检测,操作流程如下:
(1)制备标准品:精确称量0.1g乳清蛋白,加水稀释至100mL。
(2)样品制备:取10mL牛奶加入90mL去离子水中,混匀得到10%的牛奶乳液。
(3)比色法分析:将标准品和样品分别取2mL,加入试管中,加3mL试剂A,混匀并放置于室温下反应10min,然后再加入2mL试剂B,进行颜色比较。
2.光度法
光度法适用于检测复杂样品中的蛋白质含量。常见的光度法有BCA法、Lowry法、Biuret法等。优点是操作简便,准确度较高,但是不适用于检测含有酚类物质或表面活性剂的样品。
3.电泳法
电泳法是一种在凝胶上进行蛋白质分离和定量的方法,其中SDS-PAGE法和IEF法是最常见的两种电泳法。该法优点在于蛋白质分离效果好、灵敏度高,但需要较为复杂的实验条件和专业的设备。
四、总结
乳制品作为人们日常生活中常见的食品,其蛋白质检测方法多种多样。根据其不同类型、所含成分的差异,采用不同的检测方法。常用的蛋白质检测方法包括常规比色法、光度法和电泳法等。对于乳制品行业来说,加强对蛋白质检测技术的研究和应用,对于提高产品质量、保障消费者健康非常重要。