双缩脲试剂是一种常用的蛋白质检测试剂。它与蛋白质反应形成紫色复合物，可以使用光度计测定吸光度，从而测定蛋白质的含量。这种方法的原理是什么？
蛋白质是生命体中不可或缺的大分子，它们在身体中扮演着各种重要的生物学角色。因此，对于蛋白质含量的准确测定对于许多实验室非常重要。双缩脲试剂检测蛋白质的原理是基于蛋白质与双缩脲（2,4,6-三硝基苯肼）反应的特性。
首先，当双缩脲加入到蛋白质溶液中时，它会通过化学反应将其还原成低价态单缩脲（2,4-二硝基苯肼）。这个过程是由蛋白质所提供的氢离子和电子完成的。在这个过程中，一些硝基羟基苯胺形成的分子也可能与单缩脲反应，形成一种新的分子。它们的结构经过一系列变化，最终形成了一系列具有吸收紫外-可见光谱的结构。此结构是肼合物，有着类似于那些含有氮原子的唾液酸，嘌呤和嘧啶环的化合物。它们波长在540nm处，在这个波长下呈现出强烈的吸收。
因此，生成的肼化物所产生的吸收的强度与蛋白质中的含量成正比。这意味着，通过测量吸光度可以确定溶液中蛋白质的含量。这个方法被称为‘巴比拿蛋白质定量法’，最早是由Gustav J. F. Weber 和Mirko Babina在1949 年提出的。这个方法取代了以前的蛋白质定量方法，比如加酸淀粉试剂和Lowry法，它们都有一定的缺陷，例如光谱上的干扰、浓度范围的限制和昂贵等。
双缩脲试剂检测蛋白质的特点是，这种定量方法很灵敏，特异性高、操作简便且能够将样品制备的变异性减小到最低限度。同时，这个方法也比较经济，可以用于大量试验。
需要指出的是，当该试剂与其他物质反应时，也会产生紫色复合物，从而干扰检测。但通过多重测定和吸收谱线性拟合，可以减小干扰的影响。此外，在这种定量方法中，也要注意到样品的一些影响因子，比如样品的大小和混浊度，这些都会对吸光度的测量产生影响。
总结而言，双缩脲试剂检测蛋白质的本质是，双缩脲通过还原，与蛋白质形成肼化合物，进而形成可见光谱吸收的紫色复合物。测定复合物的吸光度来确定蛋白质的含量。这个方法具有灵敏性高、特异性高、操作简单、可靠性高、经济等特点，因此在生物化学和生物学范围的蛋白质测定中被广泛应用。