制备试剂:
1. 酸性溴甲酚绿溶液(0.2%)
将0.2g溴甲酚绿加入25ml的95%乙醇中,并用盖有滤纸的漏斗过滤,过滤后的溶液加入75ml的0.1M醋酸酸化而制备得到0.2%的酸性溴甲酚绿溶液。
2. 碱性溴甲酚绿溶液(0.2%)
将0.2g溴甲酚绿加入50ml的95%乙醇中,并用盖有滤纸的漏斗过滤,过滤后的溶液加入50ml的0.025M氢氧化钠溶液碱化而制备得到0.2%的碱性溴甲酚绿溶液。
步骤:
1. 取白蛋白标准品浓度约1g/L,加入50μl的酸性溴甲酚绿溶液,混合后立即加入1.95ml的氢氧化钠缓冲液(pH 8.6),混合均匀,10分钟后测定样品吸光值。
2. 用同样的方法对待待测血清样品进行处理,测定吸光值。
3. 用标准曲线法计算出待测血清样品中白蛋白的浓度。
原理:
本法基于酸性溴甲酚绿及缓冲液中氢氧化钠的缓冲作用,使得白蛋白在弱碱性溶液中产生负离子,与酸性溴甲酚绿形成复合物,产生特有的吸光峰。在一定范围内,酸性溴甲酚绿与白蛋白形成的复合物的吸光量和白蛋白浓度成正比关系,因此可以用反应溶液吸光值与已知白蛋白浓度的标准品的吸光值制作标准曲线,再用待测血清样品的吸光值绘制同一曲线并计算其白蛋白浓度。
优点与应用:
溴甲酚绿法操作简单,适用于一般浓度范围内的血清样品测定白蛋白。此外,本法还可以应用于口服抗凝剂华法林治疗下的血浆白蛋白测定。但是此法测定结果受到其他物质(如乙醇、胆汁酸、葡萄糖酸、胆红素和尿素等)的干扰比较大,当需要考虑这些物质对结果的影响时,可以选择其他测定方法。