bca 法蛋白含量测定原理

发布时间:2023年7月24日 09:20

BCA法是一种测定蛋白质含量的方法,其全称为“双硫键还原剂-双酰胺试剂比色法”,是以双硫键还原剂为基础的方法。使用该方法可以准确、快速、灵敏地测量样品中的蛋白质含量。该方法是常用的蛋白质定量方法之一,其原理是利用蛋白质与双酰胺试剂(BC reagent)之间的还原反应发生变化,从而获得颜色强度来计算样品中蛋白质的浓度

BCA法的原理是将蛋白质样品与BC reagent进行反应,通过还原反应,将Cu(II)还原为Cu(I),并在还原的过程中生成紫色络合物。生成的紫色络合物的强度与蛋白质的浓度呈正比,所以可以通过测定紫色络合物的强度来计算样品中蛋白质的浓度。

BCA法的测量主要分为以下几个步骤:

1. 样品的制备:首先,需要将蛋白质样品与含有洗涤剂、离子强度调节剂和还原剂的缓冲液混合,这可以使蛋白质样品和试剂混合均匀,同时排除干扰物和调节 pH 值。

2. 与试剂的反应:将混合好的样品与BC reagent混合,经过一定时间的反应(15-30分钟),产生紫色络合物。其中,BC reagent的主要成分是含有二氢吡啶-2-硫代甲酰氨基甲酸的含有还原剂的缓冲液。

3. 颜色测定:生成的紫色络合物的强度与蛋白质的浓度呈正比。可以通过光谱仪或显微镜等分光光度计测定试剂和样品混合物中的紫色络合物的吸光度。这可以用来计算样品中蛋白质的浓度。

4. 标准曲线:为了得到计算蛋白质浓度的比例因子,需要使用待测样品和标准品进行测量,将标准品的吸光度与已知浓度数据建立标准曲线,最终使用标准曲线来计算待测样品中蛋白质的浓度。

总的来说,BCA法是一种非常精确的测定蛋白质含量的方法,通常比传统的Lowry法和Bradford法更具有灵敏度和稳定性。同时,该方法可以适用于各种类型的标本,例如细胞裂解物、血清和唾液等生物学样本。