测定蛋白质含量的方法主要有

发布时间:2023年7月9日 00:56

蛋白质是生命体中广泛存在的一类生物大分子,具有非常重要的生理功能,如组织结构支持、酶催化、激素调节、免疫保护等。因此,测定蛋白质含量有着非常广泛的应用,在医药、食品、环境、农业等领域均得到了应用。本文将介绍主要的蛋白质含量测定方法,包括传统的乔纳斯定量法、酰胺胺基酸定量法,以及现代的分光光度法、比浊法和生物传感器法等。

一、 乔纳斯定量法

乔纳斯定量法是一种传统的蛋白质含量测定法,该方法采用等电点电泳法将蛋白质分离,并使其转移至含有一定浓度Cu2+离子的溶液中,形成紫色络合物。通过比色计测定络合物的吸光度,可以计算出蛋白质的含量。该方法因需要使用复杂的仪器设备,且并不适用于液态蛋白质的测定,因而逐渐被替代。

二、 酰胺胺基酸定量法

酰胺胺基酸定量法是另一种久负盛名的蛋白质含量测定法,其基于蛋白质中酰胺基团与硫酸铵的反应。通过测定随着加入硫酸铵浓度的逐渐增加,反应生成物中的紫外吸收值的变化,可以推算蛋白质的含量。该方法需要仪器较少,成本低廉,但其仅仅是通过相对测量,不能确定真实的蛋白质含量。此外,某些氨基酸可能并不包含酰胺基团而与硫酸铵无法反应,也会导致结果的不准确性。

三、 分光光度法

分光光度法是一种通过测量样品吸收或透过光的量来测定样品浓度的方法,因其快速、灵敏、稳定的特点,已成为蛋白质含量测定的广泛应用方法之一。其中,最常用的是比色法,其原理是通过特定荧光染料与蛋白质形成络合物,测定对应的吸光度,并以标准蛋白质溶液作为内标,计算出未知样品的蛋白质含量。常用的比色剂包括本分(BCA)、劳斯法(Lowry)、布拉德福(Bradford)等。

四、 比浊法

比浊法是另一种常用的蛋白质含量测定法,其原理是在特定的条件下,蛋白质与比浊剂(如硫酸铜、三氯乙酸等)形成混浊的沉淀,测定沉淀的光密度,从而计算出蛋白质的含量。该方法简单、快速、灵敏,但需注意样品预处理、反应条件的控制等因素。

五、 生物传感器法

生物传感器法则是应用广泛的一种现代蛋白质含量测定方法,其基于生物识别元件(如抗体、酶等)的特异性与高效性,通过与蛋白质反应产生的目标分子或代谢产物电化学或荧光信号的变化,测定蛋白质含量。该方法响应速度快,灵敏度高,适用于复杂样品中蛋白质的测定,并可实现实时监测。

总之,不同的蛋白质含量测定方法各有优点和适用范围,选择合适的方法需考虑样品的性质、测定需要、仪器设备和经费等因素。