双缩脲法测蛋白质含量原理

发布时间:2023年5月2日 09:28

双缩脲法是一种常用的测定蛋白质含量的方法,其原理是蛋白质在硫酸钾存在下与双缩脲(二甲基环己氧基羰基肼)反应生成紫色化合物,根据化合物的吸光度可以测定蛋白质含量。

具体来说,双缩脲法测蛋白质含量的步骤如下:

1. 样品处理:将要测定蛋白质含量的样品(如细胞提取物、血清、酪蛋白等)加入适量的蛋白质沉淀剂(如三氯乙酸、硫酸铵等),使蛋白质沉淀。

2. 溶解蛋白质:将蛋白质沉淀溶解在适量的缓冲液中(如三氯乙酸、硫酸铵等),使其达到适宜的浓度。

3. 加入试剂:取一定量的蛋白质溶液,加入一定量的双缩脲试剂,并在一定温度下反应一定时间。

4. 吸光度测定:将反应溶液经过离心沉淀,得到紫色沉淀,用加热水溶解后测定其吸光度,以此得到蛋白质含量。

双缩脲法测蛋白质含量的优点在于操作简便、快速、灵敏度高,并且测定结果准确可靠。但是需要注意的是,该方法只能测定溶液中总蛋白质含量,并不能区分各种蛋白质的含量。同时,在某些特定情况下,如样品中含有还原剂、氨基酸、糖等物质时,会影响双缩脲法的测定结果,需要进行修正。因此,在进行蛋白质含量测定时,需要根据实际情况选择合适的方法和试剂,并严格按照操作程序进行实验,以确保测量结果的准确性和可靠性。