蛋白质定量测定的方法有哪些?

发布时间:2023年6月7日 22:32

蛋白质是生命体内的重要组成部分,具有各种功能。因此,为了研究生命体系的正常和异常功能,需要准确测定蛋白质的含量。下面将介绍蛋白质定量测定的几种常用方法:

一、分光光度法

分光光度法是其中最简单和最快速的方法之一。它基于在一定波长下的蛋白质与特定试剂反应的光学吸收。常用的试剂有Biuret、Lowry和Bradford。 Biuret试剂在560 nm处测定,Lowry试剂在750 nm处测定,Bradford试剂在595 nm处测定,这些波长是蛋白质的吸光峰。这些试剂的反应机理各不相同,但都基于蛋白质与试剂生成的复合物的吸收特性。相对而言,Bradford试剂灵敏性更高,且响应线性范围更广,因此被广泛应用于蛋白质测定领域。

二、比色法

蛋白质比色法可以根据蛋白质和某种化学试剂的反应生成的复合物的颜色变化来测定蛋白质的含量。例如,Biuret试剂在与蛋白质反应后形成紫色,这种紫色的强度与蛋白质的含量成正比。近年来,超微量比色法也得到了广泛应用,可以仅使用微量样品进行准确测定。

三、荧光法

荧光法是一种测定蛋白质含量的敏感方法。在荧光素染料存在下,蛋白质生成的复合物可以发出荧光,这个荧光可以在特定波长下被测量,并被用于蛋白质含量的计算。荧光法主要用于低浓度和高分子量的蛋白质检测。

四、放射免疫法

放射免疫法是一种利用放射性同位素测定蛋白质含量的方法。经免疫反应后,标记放射性同位素的抗体可以通过放射性计数器或显像仪来测量,确定蛋白质的含量。对于极为微量样品的检测,放射免疫法是一种高灵敏度的方法,但由于储存和处置放射性材料的困难,现在已经不被广泛使用。

总而言之,蛋白质定量测定方法各有特点,实验者可以根据实验对象,时间和设备条件选择相应的技术进行测试。