检验蛋白质的方法

发布时间:2023年3月31日 20:49

蛋白质是生物体中最基本的组成部分之一,其在生命体系中具有非常重要的生物学功能。为了更好地研究和分析蛋白质的性质和反应过程,需要对蛋白质进行各种物理化学分析和检验。下面将对常见的蛋白质检验方法进行介绍。

一、UV吸收法(280 nm)

大多数蛋白质中含有芳香基团,如苯环、色氨酸和酪氨酸等。这些芳香基团可以吸收UV光谱的280 nm波长处的光线,因此成为了检验蛋白质的一种方法。

该方法的优点是操作简单,灵敏度高,通常可做微量蛋白质的含量测定。但也存在一些局限性,比如某些非芳香族氨基酸无法被检测出来,且具有较好的线性范围。

二、生物硫法

生物硫法是检测试样中含有的蛋白质量的一种常用方法。该方法的原理是利用生物试剂将蛋白质中含有的硫元素氧化为硫酸盐,通过测量所释放的硫酸盐的数量来推算蛋白质的含量。生物试剂通常使用的是硫酸盐还原酶,还原酶转化过程中可以产生硫代硫酸酰氨基酸,通过使用发色剂做法分析进行这种蛋白质检测。

三、BCA法

BCA法可以用于测定浓度在0~1.5mg/ml范围内的蛋白质样品体积。该方法的原理是红色欧试剂被还原后可产生蓝紫色 Kelley-Patterson醛基,进而和二脲基苯酰亚胺发生反应,形成紫色的复合物,复合物的量和蛋白质的量相等。因此测量出复合物的吸光度即可计算出蛋白质的含量。

四、Lowry法

Lowry法是一种较为经典的蛋白质定量方法。该方法的优势是检出正常状况下非常低浓度的蛋白质,同时可以进行大量分析,使用范围很广。

该方法基本原理是使用三种试剂对蛋白质中的酪氨酸、精氨酸以及含有苯环氨基酸等表明适用;试剂A氧化酚乙酸(或磺酸化酚乙酸)在300 nm处吸光产生黄色化学计量气体吸收尽量慢。样品与试剂A、磷钾缓冲液和硷液混合后,在室温下孵育20分钟。预准确级白色Bsa溶液用于制定标准曲线数列。

以上介绍了常用的几种蛋白质检验方法,不同的方法各有优缺点,根据研究需要可以选择合适的方法进行蛋白质检验。