蛋白质是生物体内非常重要的有机物,参与了众多的生化反应和机体内部的物质运动。因此,准确测定蛋白质的含量是非常重要的。国家标准中规定了几种常用的蛋白质测定方法,下面将其中的三种方法介绍一下。
一、比色法
比色法是常用的蛋白质测定方法之一。其原理是蛋白质与某些物质反应后形成吸收波长为540nm的染色体系,这个吸收波长越高,对应的蛋白质含量也就越高。比色法的具 体步骤如下:
1.制备一定浓度的标准样品。
2.准确称取待测物样品。
3.加入一定量的比色试剂,让其反应。
4.通过分光光度计测定吸光度。
5.依据标准曲线,计算出蛋白质的含量。
比色法测定蛋白质优点是快捷简便,操作容易。但其缺点也比较明显,最显著的是测量灵敏度比较低,只适用于高含量的蛋白质样品。
二、显色比浊法
显色比浊法是通过蛋白质与硫酸铜反应产生蓝色色素,使用无机盐(如肼)将浊度比较大小以得到蛋白质含量的方法。显色比浊法的具体步骤如下:
1.制备一定浓度的标准样品。
2.取待测物样品,将其加入硫酸铜和肼等试剂。
3.在加入试剂的过程中,产生的浊度逐渐变大,直到达到最大浊度。
4.可以逐渐的添加无机盐,将浊度降低,直到与标准样品测量的浊度相同,即可输出蛋白质的含量。
显色比浊法相较于比色法而言,在测量速度、环境因素干扰等方面都有着较大的优势,但其样品对环境的要求较高。
三、尿素-多肽染色法
尿素-多肽染色法是通过尿素 denaturant 蛋白质后,多 肽与某些染色试剂形成复合物的方法测定蛋白质的含量。这种方法的具体实行步骤如下:
1.制备一定浓度的标准样品。
2.将待测样品处理,其中重要的一步就是将蛋白质用尿素进行 denature。
3.将处理后的样品和多肽试剂混合检测。
4.通过比色计等设备测定出吸光度值,并且按照标准曲线计算蛋白质的含量。
尿素-多肽染色法是一种简单、快速且准确的测量方法,并且在误差方面有着比较高的信度。但该方法存在比较明显的局限性,多肽试剂的灵敏度较低,一定程度上限制了该方法的应用范围。
总的来说,以上三种方法都是较为常见的蛋白质测定方法,其相互之间的优缺点不尽相同。因此,选择何种方法测定蛋白质也需要结合具体测定要求、误差容忍度等多个因素考虑。