常用蛋白质含量测定方法有哪些

发布时间:2023年7月17日 20:57

蛋白质是生命体中的一种基本分子,含有大量的氮元素,是生物体重要的组成成分,因此其含量测定是生物化学和分子生物学中的一个基础性研究内容。蛋白质含量的测定方法有很多,常见的包括生物学法、化学法和物理学法。

一、生物学法

1.双向电泳法

双向电泳法是一种利用电生理移动和化学性质不同的蛋白质在电场中分离的方法,通过电泳,可以将混合物中的蛋白质分离出来并定量测定。优点是适用于各种类型的蛋白质,能够得到较为准确的分离结果。

2.差减比色法

差减比色法是一种测定蛋白质含量的分光测量方法,其原理是将蛋白质与某种化学试剂反应生成化合物,从而利用双束比色法以及差减法来测定其浓度。它具有样品处理简单,操作简单、方便和精度高等特点。

二、化学法

1.布拉德福法

布拉德福法是一种蛋白质浓度检测法,它是一种纯化后的蛋白质含量测定方法,其原理是将蛋白质加入亚甲基蓝(Coomassie Blue)溶液中,蓝色染料与蛋白质结合后会发生共价键形成紫色复合物。利用紫色复合物的吸光度检测含量的多少。优点是可测定小量的蛋白质,测量范围较广。

2.生物素亲和法

生物素亲和法是通过加入生物素标记蛋白质,然后用生物素识别结合物质,最后对其进行比色分析。其特点是能够测定较为微弱的信号、通过性能好的亲和层析柱进行检测能够有效地达到准确分离并测量的效果。

三、物理学法

1.紫外分光光度计法

紫外分光光度计法是利用蛋白质在紫外线照射下的特性吸收产生信号,根据信号的强度来量化蛋白质浓度的一种分光测量法。它具有分析速度快,操作方便、灵敏度高等特点。

2.比旋法

比旋法是利用物理学中化合物对于圆偏振光旋紫旋转力的差异来测定蛋白质含量的方法,其原理是依据溶液中蛋白质所造成的旋光度来计算蛋白质的浓度。该方法通常用于测定未经过脱盐的未纯化蛋白质的含量,常用于血液、尿液中的蛋白质浓度测定。

综上所述,不同类型的蛋白质含量测定方法各自有其特点和适用范围。在实际使用时,可以根据需要进行选择,以获取较为准确的测量结果。