蛋白质是生物体中重要的基本组成部分之一，它们参与了许多生理功能的实现，如酶催化、信号传导、运输、结构支持等。因此，对于蛋白质的研究，是生命科学领域中非常重要的研究方向之一。蛋白质序列测定就是其中的一个重要内容，是了解蛋白质结构和功能的基础。
蛋白质序列测定方法根据测定的目的和具体实验条件不同，分为分析性方法和结构性方法。分析性方法一般只能确定蛋白质的氨基酸序列，如克利文法（Cleavon法）、肽质量谱分析等；结构性方法则可以同时确定蛋白质的氨基酸序列和三维结构，如X射线晶体学、核磁共振（NMR）等。
1. 克利文法
克利文法是一种分析性蛋白质序列测定方法，是使用外源蛋白酶对待测蛋白进行外切，并对其产生的氨基酸碎片进行分析，从而确定蛋白质的氨基酸序列。克利文法常用的酶有胰蛋白酶、锯齿酶、胃蛋白酶等，蛋白酶的选择取决于蛋白质的性质和降解特点。通过外切过程中产生的氨基酸残基组合，可以推断出原始蛋白质的氨基酸序列。克利文法适用于小分子蛋白质或多肽的氨基酸组成测定，比较简便、快速，成本较低。
2. 肽质量谱分析
肽质量谱分析是一种高效、灵敏的分析性蛋白质序列测定方法。该方法依据肽分子的质量-电荷比（m/z）值和相应的强度信息来鉴定和分析肽段，进而确定蛋白质的氨基酸组成和序列。在质谱分析中，蛋白质经过胰蛋白酶的切割分离为多肽片段，然后经过色谱等前处理步骤，使其离子化，在质谱仪上进行肽质谱分析。通过分析单一多肽片段的质谱图，可以测定出该片段的氨基酸序列，并据此重组原始蛋白质的完整序列。肽质量谱分析适用于相对小的蛋白质和多肽的氨基酸组成测定，优点是精确度高、重复性好、分析速度快。
3. X射线晶体学
X射线晶体学是一种常用的结构性蛋白质测定方法，它可以同时确定蛋白质的氨基酸序列和三维结构。该方法利用X射线的衍射原理，将晶体结构转化为图像，从而得到蛋白质的结构信息。在X射线晶体学中，通过蛋白质晶体的生长和处理，获得高质量的晶体，然后把它们置于X射线束中进行辐射，再收集由晶体返回的衍射光信号，最后通过计算分析得出蛋白质的分子结构。 X射线晶体学方法精确度高，能够揭示蛋白质的三维结构和结构变化机制，广泛应用于蛋白质结构研究和生物医学领域。
4. 核磁共振
核磁共振（NMR）也是一种常用的结构性蛋白质测定方法，它可以帮助确定蛋白质的三维结构和柔性区域，适用于相对小的蛋白质和小分子化合物的结构研究。核磁共振方法利用蛋白质分子的核磁共振信号来描述其结构和动力学性质。在NMR测量中，蛋白质分子处于强磁场中，各个核自旋状态会发生变化，产生的信号可以被分析来解析蛋白质的结构和动态过程。NMR方法对样品要求不高，不需要结晶，可以在溶液中进行研究，能探测蛋白质的结构和功能之间的关联关系。
综上所述，蛋白质序列测定是蛋白质研究的基础，涉及到多种方法和技术，分析性方法旨在确定蛋白质的氨基酸序列，结构性方法则能够同时解析蛋白质的三维结构和动态性质。蛋白质序列测定在基础生物学研究、药物研发、生物工程等领域都有重要的应用，其发展对于生命科学领域的进一步发展和进步至关重要。